Nonsense mutaties gekoppeld aan premature stopcodons in gecorrigeerde 16HBEo-cellijnen verschillen in gevoeligheid voor het mRNA-afbraaksysteem

Cellijnen met heterologe expressie zijn van beperkt belang, omdat ze geen introns omvatten. In de context van het onderzoek van nonsense mutaties gerelateerd aan premature stopcodons (PTC) met defecten kan hierdoor het NMD-systeem, dat de mRNA's afbreekt die deze PTC's bevatten, niet worden bestudeerd.

De cellijn die is vastgesteld door D Gruenert, 16HBE14o-, wordt door SV40 vereeuwigd en is gevoelig voor het NMD-systeem. Hierdoor kunnen in verband met V470 of M470 via CRISPR/Cas9 verschillende homozygote lijnen worden gegenereerd voor G542X, W1282X, Y122X, R553X, R1162X, G551D, N1303K en F508Del. Met deze modellen kan bij nonsense mutaties het niveau van het mRNA-afbraaksysteem in de basale toestand worden getest. Hierdoor kan worden gecontroleerd of het transcriptieniveau volgens verwachting is verlaagd voor de 3 mutaties G542X, W2283X en Y122X. Deze lijnen maken ook differentiële farmacologische evaluatie mogelijk van de NMD-remming door SMG1 – een krachtige NMD-remmer – en van de uitlezing met G418. De remming van NMD wordt getest door het gecorrigeerde mRNA-niveau; het uitlezen door het herstel van CFTR-activiteit in de kamer van Ussing. De mutatie W1282X is bijvoorbeeld erg gevoelig voor het NMD-systeem, maar reageert weinig op G418, in tegenstelling tot Y122X.

Deze waarnemingen tonen aan dat de context van de PTC het uitlezen beïnvloedt en illustreren de relevantie van deze cellijnen.

Referentie

CONGRES NACFC 2018 - Vrijdag 19 oktober 2018
In vitro models of CF
W16.4 – Abstract 164 - CFTR PTC variants expressed in gene edited 16HBE14O-cel lines show differential sensitivity to nonsense mediated decay
Spreker: HC Valley